啥玩意啊！！！为什么冻存的类器官复苏后都养不活了！！！
类器官长得白白胖胖，冻存复苏失败！！！无法开展下游实验，一切从头开始，前功尽弃，这种痛苦谁懂？
类器官长到什么程度适合冻存呢？害怕，都不敢继续冻存了，呜呜……
类器官复苏需要注意什么？求大神指点一二，“冻存-复苏神器”赐予我力量吧！！！
想要成功复苏类器官，进行下游实验，冻存和复苏都很关键。那冻存时应该注意哪些问题呢？复苏的时候要把控好哪些细节呢？今天桢博士将为大家提供以下几点作为参考，为大家复苏类器官保驾护航。
明明冻存前算好类器官扩增数量，为什么回收后变少了，好奇怪？？？
别担心桢博士为你分析原因：
类器官可能被粘在枪头以及EP管壁上，为了防止类器官粘黏在EP管管壁，在操作的每一步都要使用防黏润洗液（货号：E238002）。
当使用角转子离心机时，类器官都被甩在管壁上，导致沉淀不明显，看不见类器官。建议采用水平转子代替角转子，可以有效减少类器官挂在离心管壁的情况。
离心后，类器官和基质胶不分层混合在一起，这是因为当类器数量过少或者直径小于100μ时，由于分离不当，导致类器官与基质胶难以分离被带走。所以选择好的基质胶（货号：M315066）和分离液（货号：E238006）是至关重要的。
解决方法1：用力重悬离心后基质胶和类器官仍不分层可尝试以下方法：
① 弃上层培养基，保留基质胶与类器官沉淀，重新加入1mL基础培养基，再次用力重悬；
② 离心，若类器官与基质胶仍没分离，可弃上层培养基，保留基质胶与类器官沉淀，直接加入5倍体积类器官传代消化液，正常消化即可。
解决方法2：使用伯桢类器官分离液（货号：E238006）分离基质胶即可，效果更好。
所以针对以上情况，伯桢团队立志为大家解忧排难，研发了以下几款产品，为类器官顺利冻存保驾护航！
桢博士，关于冻存复苏我还有其他问题，能帮帮我吗？
类器官通常会在传代 2-3 次之后选择冻存。为了达到最佳的效果，可以选择类器官生长状态最优时5次左右再进行冻存。
类器官应在生长良好、致密度约为80-90%活力以上的状态下冻存。类器官活力差在冻存后的成活率很小，因此，一定要在细胞旺盛分裂时期冻存。建议冻存量在2*105/mL以上，类器官大小小于100um，其中鳞癌类器官不超过50um，腺癌及空泡类器官不超过100um。
类器官不可长期保存在-80℃冰箱中。我们建议在-80℃冰箱中的保存时间不要超过一周。如果要长期保存，要转移到液氮罐里。类器官细胞储存在液氮中，温度达-196℃，使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，理论上储存时间是无限的。为妥善起见，特别是很多未被冻存过的细胞在首次冻存后要在短期内复苏1次，观察细胞对冻存的适应性。已建系的细胞最好也每年复苏1次后，再继续冻存。
迅速在37℃水浴锅中将冻存液溶解至冰水混合物的状态后（避免使用高温或暴露时间过长的方法，以免对细胞造成热伤害），转移至类器官基础培养基中（货号:B213151或B213152）稀释冻存液；稀释冻存液时，轻柔吹打，因为冻存液与基础培养基的渗透压不同。建议复苏后的前三天保持1天1换液，以保证类器官生长所需的营养环境。
虽有冻存液保护类器官，但是还是避免不了对类器官的损伤，在正常类器官上尤为明显，建议复苏后的前三天保持1天1换液，使培养基的因子浓度一直保持在一个高水平的状态，从而快速恢复类器官生长状态。并且要选择优质培养基，如果培养基体系达不到尽可能真实还原体内微环境的效果，培养过程中，状态越来越差。而伯桢试剂盒的开发便是追溯源头，严格遵循底层发育逻辑。针对高异质性组织来源的类器官，伯桢研发出不同体系，细化到适用于不同亚型类器官的标准化试剂盒。
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