结肠是位于盲肠和直肠之间的一段肠道，其主要作用是：（1）吸收食物残渣中的水分与电解质；（2）分泌粘液，防止肠壁受到机械损伤和细菌侵染；（3）通过蠕动将排泄物推入直肠。结肠黏膜上皮为单层柱状细胞构成的上皮，其细胞类型与小肠上皮类似，不同于小肠的是，结肠内表面没有绒毛，仅有隐窝，此外杯状细胞比例较高，其分泌的粘液有助于润滑结肠粘膜。通过分离结肠隐窝中的Lgr5+结肠干细胞，与基质胶混合、凝固后，加入对应的结肠类器官培养基进行三维培养，即可形成结肠类器官。干细胞持续进行增殖分化以更新上皮，凋亡的细胞则会脱落至类器官空腔中。结肠类器官培养体系的成功建立，可以为研究肠道疾病，如囊性纤维化（cystic fibrosis，CF）、炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）、肠道损伤再生等提供极大的便利。
A：鼠结肠类器官原代培养第0天，可见结肠组织隐窝结构；
B：鼠结肠类器官原代培养第1天，可观察到隐窝发育为3D细胞球；
C：鼠结肠类器官原代培养第6天，可见单细胞发育而来的类器官，完整隐窝发育而来的类器官可长至约200 μm；
D：鼠结肠类器官原代培养第10天，类器官生长明显完整隐窝发育而来的鼠结肠类器官直径可达250 μm。（比例尺：100 μm）
| P1-D0 |
P1-D3 |
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A
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B
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| P1-D5 |
P1-D7 |
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| C |
D |
1例鼠结肠类器官首次传代后（P1）生长过程示例：经消化的类器官在传代培养起始时多为不规则细胞团块的状态，这些细胞团块可在传代后24小时形成新的3D细胞球克隆；在生长至第3天时，可观察到类器官明显增大，且有空腔结构；在生长至第7天时，类器官直径在150 μm以上，空腔内凋亡细胞累积。
A：鼠结肠类器官首次传代后第0天的生长状态，可见消化后不规则的细胞团块；
B：鼠结肠类器官首次传代后第3天的生长状态，平均直径约50 μm；
C：鼠结肠类器官首次传代后第5天的生长状态，平均直径约120 μm；
D：鼠结肠类器官首次传代后第7天的生长状态，囊泡类器官中心积累凋亡细胞，直径达到150 μm以上。（比例尺：100 μm）
| 扩增组 |
| P5-D0 |
P5-D5 |
P5-D7 |
P5-D10 |
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| 分化组 |
1例鼠结肠类器官（P5）分化培养生长示例：相较于扩增组类器官，分化组鼠结肠类器官的生长速度较低，平均直径较小。
| P3-D0 |
P3-D1 |
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A
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B
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| P3-D4 |
P3-D7 |
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| C |
D |
1例鼠结肠类器官（P3）复苏培养生长过程示例：复苏铺板后的类器官呈不规则细胞团块状，在生长至第1天时可观察到团块变圆形成新克隆，继续生长至第4天这些细胞球直径明显增大且出现囊泡形态直径可达150 μm，在生长至第7天时，大部分鼠结肠类器官呈现厚壁囊泡中心聚集凋亡细胞的状态。
A：鼠结肠类器官复苏培养第0天，复苏后形态多为细胞团块状；
B：鼠结肠类器官复苏培养第1天，可观察到细胞团块形成新的3D细胞球；
C：鼠结肠类器官复苏培养第4天，类器官平均直径约150 μm；
D：鼠结肠类器官复苏培养第7天，类器官直径可达200 μm （比例尺：200 μm） 。
鼠结肠组织和类器官HE染色图示：
A：鼠结肠组织HE染色，染色可见黏膜层、肌层、浆膜层，并可见隐窝单管状直接开口于肠腔的典型形态；
B：扩增组鼠结肠类器官HE染色，未分化的鼠结肠类器官为单层上皮细胞形态，空腔内凋亡细胞脱落堆积
C：分化组鼠结肠类器官HE染色 ，分化后部分鼠结肠类器官转为厚壁空泡形态。
比例尺：100 μm
| Ki67 |
| 鼠结肠组织 |
扩增组类器官 |
分化组类器官 |
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| A |
B |
C |
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| D |
E |
F |
| E-cad |
图A、B、C分别为鼠结肠组织、扩增组鼠结肠类器官、分化组鼠结肠类器官的Ki67免疫组化染色，图D、E、F分别为鼠结肠组织、扩增组鼠结肠类器官、分化组鼠结肠类器官的E-cadherin免疫组化染色。比例尺：100 μm。
Ki67标记鼠结肠组织中的增殖细胞，在隐窝底部高表达；E-cad，钙粘蛋白，标记所有上皮细胞，膜定位。扩增组鼠结肠类器官中存在大量Ki67染色阳性的细胞，显示类器官具有较强的干性和增殖能力；分化组的鼠结肠类器官Ki67阳性率下降，表明类器官增殖活力降低，与明场呈现出生长速度较慢一致。
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| A |
B |
鼠结肠类器官Ki67与E-cad免疫荧光共染：（A）扩增组；（B）分化组（比例尺：100 μm）
鼠结肠类器官IF染色结果与IHC结果相同，扩增组鼠结肠类器官Ki67阳性细胞数目多，显示类器官具有较强的干性和增殖能力，分化后的鼠结肠类器官Ki67阳性率显著下降。
以上鼠结肠类器官全部由伯桢鼠结肠类器官试剂盒（K2204-MC）培养。
